Капиллярный электрофорез

Методом, наиболее подходящим для рутинных скрининговых исследований, является метод капиллярного электрофореза в исполнении автоматических капиллярных систем Minicap и Capillarys-2 Flex Piercing производства компании SEBIA.

Данный метод основан на разделении заряженных молекул в жидкой среде внутри сверхтонкого кварцевого капилляра под действием электрического тока. Белковые молекулы при этом разделяются согласно своему электрическому заряду. На разделение также оказывают влияние рН используемого буферного раствора и электроэндоосмотический поток. Метод не требует предварительной обработки образцов и позволяет осуществлять как качественную, так и количественную оценку фракций трансферрина. Расчетная формула CDT полностью соответствует текущему определению аналита (суммарное значение углевод-дефицитных фракций трансферрина), и одновременно с этим программное обеспечение прибора дает возможность производить количественную оценку каждой карбогидрат-дефицитной фракции в отдельности, что позволит использовать данные системы после утверждения международных рекомендаций по стандартизации CDT без каких-либо ограничений.

page8

Разделение изоформ трансферрина методом капиллярного электрофореза основано на разнице их электрического заряда, величина которого прямо пропорциональна количеству остатков сиаловой кислоты. Аналитический этап на системах Minicap и Capillarys-2 Flex Piercing полностью автоматизирован и включает в себя разведение образца и его инжекцию в анодную часть капилляра. Под действием высокого напряжения изоформы трансферрина в образце, мигрируя по всей длине капилляра, разделяются на фракции, каждая из которых, достигая катодной части капилляра, последовательно регистрируется путем измерения поглощения света на длине волны 200 нм. Детекция изоформ трансферрина осуществляется в следующем порядке: асиало-, дисиало-, трисиало-, тетрасиало- и пентасиалотрансферрин. После завершения миграции капилляры немедленно промываются моющим раствором и подготавливаются к следующему анализу, заполняясь буферным раствором.

После детекции результаты обрабатываются программным обеспечением прибора и отображаются на экране монитора в виде процентного содержания фракций (количественный анализ) и денситометрической кривой (качественный анализ). Результаты качественной и количественной оценки импортируются в протокол исследования, служащий приложением к заключению о результатах анализа.